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S-異戊烯位點鑒定

S-異戊烯化是一種蛋白翻譯后的脂質修飾,它靶向控制許多膜蛋白,都是在癌癥和微生物感染中重要的細胞信號通路中起關鍵作用的分子。

S-異戊烯化通常是法尼基(15-碳)或香葉酰(20-碳)異戊二烯類脂鏈在蛋白上通過硫醚鍵在位于C末端貨附近的一個或者兩個半胱氨酸殘基上的翻譯后修飾。S-異戊烯化蛋白中最大的一部分是包含Ras、Rho和Rab家族蛋白的小G蛋白(small GTPases)。

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S-異戊烯位點鑒定

S-異戊烯化蛋白的意義是促進了生物合成通路中的分解。S-異戊烯化前體來自于焦磷酸異戊二烯基底物。法尼基轉移酶(FTase)催化法尼基二磷酸(FPP)轉移到蛋白質上,同時釋放了一個游離的二磷酸。香葉基香葉轉移酶1型和2型(GGTsae-I和GGTase-II)以香葉基二磷酸(GGPP)為底物。FTase和GGTase-I識別C端CaaX基序,其中C是修飾的半胱氨酸。

傳統意義上,S-?;鞍资峭ㄟ^使用諸如甲戊酸、FPP和GGPP等放射性底物進行代謝標記來顯示的,這些底物敏感性低,且需要長時間暴露才能進行檢測(數周至數月)。為了解決這些限制,蛋白?;幕瘜W報告集團被研發出來,用以改善脂化蛋白的檢測。在哺乳動物細胞中,熒光(NBD-GPP和NBD-FPP)和生物素化(BGPP)類似的異戊二烯二磷酸鹽已經成功地結合到S?;鞍咨?,但熒光集團和生物素的體積大小可能會干擾蛋白的膜靶向和下游信號傳導。疊氮和烷基異戊二烯二磷酸鹽與生物正交連接為S-?;鞍椎目梢暬峁┝烁倪M的方法。

疊氮基香葉基二磷酸和烷基香葉基二磷酸酯可在體外對含有CaaX基序的多肽和蛋白進行選擇性標記,疊氮基香葉基二磷酸酯可以再體外對香葉基話蛋白進行GGTase-I和GGTase-II標記。

在哺乳動物細胞中,疊氮法尼醇(Az-FOH)和疊氮香葉醇的代謝摻入分別與法尼基化合香葉化蛋白結合,進一步改善了上述情況。

Aimsmass提供專業的異戊烯化位點鑒定服務,異戊烯化修飾是一種蛋白翻譯后脂質修飾,它靶向控制許多膜蛋白,都是在癌癥和微生物感染中重要的細胞信號通路中起關鍵作用的分子。

實驗流程

  • ? 目標修飾蛋白標記(depends on type of samples you send us)
  • ? 異戊烯化肽段替換后富集 (optional; depends on the abundance of phosphor-peptide)
  • ? HPLC 分離, 隨后進行MS/MS 分析
  • ? 異戊烯化位點數據分析

服務優勢

  • 應用范圍廣:可對各種蛋白進行異戊烯化位點定性和相對定量分析,可找出具體修飾發生位點,結果可信可靠,可給出具體修飾肽段。
  • 操作簡單方便:無需進行放射性同位素標記或者Edman降解法進行氨基酸測序。
  • 位點高覆蓋(可選):質譜檢測前處理可對異戊烯化肽段進行標記處理,增加檢測覆蓋率。

服務流程

  • 疑問咨詢
  • 項目確認
  • 提交送樣
  • 項目展開
  • 發生報告
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