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S-棕櫚酰位點鑒定

棕櫚酸(C16:0)是長鏈飽和脂肪酸,各種脂類的重要組分在細胞膜形成,信號傳導和能量儲存中扮演重要角色。然而棕櫚酰鏈可以連接在蛋白上,此稱之為蛋白棕櫚?;⊿-棕櫚?;?,這種修飾影響蛋白的定位和功能。在人體中棕櫚酸是通過脂肪重新合成中產生,此過程主要發生在脂肪細胞,肝臟細胞和乳腺細胞中。棕櫚酸被用來磷脂和鞘脂的合成,通常是經過其他脂肪酸(例如,硬脂酸和油酸)的延伸或者脫保和處理,有些可以通過酯化生成甘油三酯儲存脂質。蛋白棕櫚?;诘鞍捉Y構和功能中起重要作用,和其他脂質修飾不同,蛋白棕櫚?;歉叨葎討B的,棕櫚?;腿プ貦磅;h調控著蛋白的功能和定位。

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S-棕櫚酰位點鑒定

S-棕櫚?;且环N重要的蛋白翻譯后修飾,通常棕櫚酰通過形成硫酯鍵鏈接在蛋白的半胱氨酸殘基上,例如下表1,S-棕櫚?;且环N特殊的蛋白S-?;?,并且類似于其他可逆的蛋白翻譯后修飾,包括磷酸化和乙?;?,S-棕櫚?;陌l生會影響蛋白結構和功能。

除了S-?;?,也有少數棕櫚酰鹽能夠連接到其他各種氨基酸的氨基集團上(例如, 甘氨酸,半胱氨酸,賴氨酸)形成N-棕櫚?;蛘咴诮z氨酸和蘇氨酸的羥基集團形成O-棕櫚?;ㄈ缦卤?)。伴隨著S-棕櫚?;l生的過程中,也會有其他脂肪酸修飾發生,例如N-和O-?;?。N端發生?;饔玫谋热缯fN-豆蔻?;?N- myristoylation),這種修飾經常發生在細胞膜外圍錨定的蛋白。S-異戊二烯化(S- prenylation)是另外一種常見的脂化作用,賦予蛋白疏水的性質并使其與細胞膜結合。

此表1中棕櫚酸通過與氨基酸殘基共價形成氧化物,酰胺和硫酯等,形成一系列O-和N-棕櫚?;鞍仔揎?,以及類似的其他蛋白脂質化修飾,包括N-豆蔻?;蚐-異戊二烯化。

最近,兩種無放射的方法學的突破,點擊化學(click-chemistry)和脂酰生物素交換(ABE)給棕櫚?;鞍阻b定帶來了新的突破。這兩種技術的發明,結合高通量蛋白質譜分析方法,為各種細胞組織以及臨床樣本發現新的棕櫚?;稽c帶來了更多可能。

Aimsmass提供專業的棕櫚?;稽c鑒定服務,S-棕櫚酰修飾位點是研究熱度比較高的一種修飾。

實驗流程

點擊化學法

  • ? 對目標修飾蛋白進行標記,通過使用棕櫚酸類似物(metabolic labeling)
  • ? 催化反應,促使發生棕櫚酰修飾蛋白帶上生物素標簽(click chemistry)
  • ? 用親和鏈霉素珠子富集發生修飾的肽段(peptide enrichment)
  • ? 對發生修飾的肽段進行質譜檢測(LC-MS/MS analysis)
點擊化學法
生物素交換法

生物素交換法

  • ? 自由巰基烷基化封閉(alkylation of free thiol group)
  • ? 去棕櫚?;幚?incubation with de-palmitoylation)
  • ? 生物標記與自由巰基反應(biotinlyation of exposed SH group)
  • ? 與親和鏈霉素珠子孵育富集生物素標記的肽段(peptide enrichment)
  • ? 對肽段進行質譜檢測(LC-MS/MS analysis)

服務優勢

  • 操作容易簡單:不需同位素標記,實驗流程簡單
  • 高精度與準確性:可鑒定分析具體修飾位點,采用Thermo Fisher質譜儀,獲取更多肽段信息,找到更多修飾位點
  • 檢測范圍廣:可檢測各種細胞或者組織中的棕櫚?;揎椢稽c

服務流程

  • 疑問咨詢
  • 項目確認
  • 提交送樣
  • 項目展開
  • 發生報告
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