等電聚焦（IEF）是確定蛋白質等電點（pI）最常用、應用最廣泛的方法。在 IEF 過程中，給定樣品的蛋白質通過 ph 梯度凝膠電泳分解。由于蛋白質在 IEF 中的電泳遷移率取決于它們的凈正電荷或負電荷，一旦達到中性 pH 值（蛋白質不再攜帶凈正電荷或負電荷的 pH 值），蛋白質就會保持在相應的 pH值中穩定。這個蛋白質變成中性（或等電）的 pH 值稱為蛋白質的 pI。
蛋白質在固定 ph 梯度凝膠（IPG）上的電泳遷移率取決于其總正電荷（酸性）或負電荷（堿性），這是 IEF 技術的基本原理。在等電聚焦（IEF）中，帶凈正電荷或負電荷的蛋白質通過 pH 梯度凝膠遷移，直到到達等電點（pI），即保持中性的 PH 值。因此，蛋白質的pI表示其凈電荷，這是決定其在特定環境中穩定性/活性的關鍵因素。通常，第一維 IPG-IEF 之后是第二維 IPG-IEF，聚焦的蛋白質被變性/還原并在 SDS-PAGE 凝膠上解析，用于隨后的免疫印跡來驗證蛋白質的身份。最近發展的一維、垂直的 IEF 和免疫印跡技術使多個樣本的并發分析（pI 測定）成為可能。
IEF 和 cIEF 是 pI 測定中最常用的兩種技術，它們可以根據 pI 的不同對蛋白質和多肽進行分離。在 IEF 中，將采用商業化的固定 pH 梯度（IPG）條帶或 pH 梯度的一維垂直 IEF 凝膠，與 IPG 條帶相比，后者可以以更簡單、更節省時間的方式分析多個樣品。對于 cIEF，它縮短了分析時間，減少了樣品的消耗。在裝入毛細管之前，樣品將首先與精確的等電點標記劑、兩性電解質和穩定劑混合。在毛細管中聚焦完成后，可原位檢測蛋白樣品的 pI。Aimsmass 有兩種方法可用于pI測定，我們的科學家將根據您的特殊要求和樣品類型優化方案。
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