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二硫鍵定位分析

二硫鍵是蛋白內部半胱氨酸殘基形成的蛋白翻譯后修飾,這共價鍵的形成來自半管氨酸的自由巰基集團,主要是由酶催化形成,例如蛋白二硫鍵異構酶和內質網氧化還原酶-1,二硫鍵是蛋白結構中重要組成部分,確保蛋白適當折疊,保持穩定和正常發揮功能。

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二硫鍵的作用

三級結構:二硫鍵確保蛋白正常的折疊;他們能夠使蛋白形成正確的結構亞型,能夠穩定更高級別的構象以確保能行使正常的生物功能。

四級結構:二硫鍵對蛋白行使正常功能起決定性作用,二硫鍵的還原能夠引起某些蛋白活性的改變。

既然二硫鍵在生物體中如此重要,科研工作者們也需要更為高效的方法進行檢測分析。有幾種常用方法可以對二硫鍵進行定位,包括核磁共振,X射線晶體分析,Edman降解,以及大部分科研工作者采用的高效液相串聯質譜方法。

Aimsmass提供專業的蛋白二硫鍵定位分析服務,二硫鍵影響某些蛋白折疊和穩定性。

實驗流程

二硫鍵分析前處理

  • ? 用NEM進行自由巰基的還原烷基化處理
  • ? 隨后用IAM對斷開的二硫鍵進行封閉
  • ? 凝膠或溶液內酶解(depends on type of samples you send us)
  • ? HPLC 分離, 隨后進行MS/MS 分析
  • ? 二硫鍵位點數據分析

二硫鍵分析酶切方式

注意:避免在樣本準備過程中的二硫鍵自然生成。

  • ? 2個半胱氨酸殘基之間反應
  • ? 1個半胱氨酸和1個二硫鍵之間反應
  • ? 2個已經形成二硫鍵的半胱氨酸之間發生的反應

提示:溫度,PH,和自由半胱氨酸殘基都有可能影響真實結果。

服務優勢

  • 高精度與準確性:能準確確定二硫鍵肽位點,排除假陽性影響。
  • 不同類型分析:可對不同的二硫鍵形成類型進行分析。
  • 快速操作簡單:前期處理簡單,不需額外實驗操作。

服務流程

  • 疑問咨詢
  • 項目確認
  • 提交送樣
  • 項目展開
  • 發生報告
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