由于x射線結晶學和核磁共振波譜學的實驗限制(蛋白質的結晶或大小限制),許多蛋白質的三級結構仍然未知。近半個世紀以來,圓二色光譜技術在結構生物學中得到了廣泛的應用,主要用于研究蛋白質在溶液中的二級結構、折疊和相互作用。事實上,一個明顯的趨勢不僅是使用圓二光譜(CD)的研究數量的增長,而且是在多少研究中將圓二光譜(CD)與其他方法結合起來作為結構生物學綜合項目的一部分。
遠紫外(波長<260nm)圓二色光譜(CD)是一種重要而成功的光譜技術,它能提供蛋白質二級結構的有意義的信息。在圓二光譜(CD)中,尋找二級結構的主要方法是通過各種不同的算法將光譜解卷積成所謂的特征光譜的加權和。對于給定的蛋白質,通過每個特征譜的相對重量,可以從組成參考集的蛋白質的結構的已知數據中計算出各自結構元素的豐度。盡管圓二光譜(CD)不能提供原子級的分辨率(與這兩種技術不同),但它可以提供關于天然和非天然蛋白質二級結構的有價值的信息,因為它可以應用于廣泛的溶液條件(如 pH、鹽、有機溶劑、脂類和溫度)。即使我們已經有了原子分辨結構,或者在核磁共振測量中驗證正確的構象/正確的折疊或溶液條件之前,圓二光譜(CD)也可能是有用的。
IEF 和 cIEF 是 pI 測定中最常用的兩種技術,它們可以根據 pI 的不同對蛋白質和多肽進行分離。在 IEF 中,將采用商業化的固定 pH 梯度(IPG)條帶或 pH 梯度的一維垂直 IEF 凝膠,與 IPG 條帶相比,后者可以以更簡單、更節省時間的方式分析多個樣品。對于 cIEF,它縮短了分析時間,減少了樣品的消耗。在裝入毛細管之前,樣品將首先與精確的等電點標記劑、兩性電解質和穩定劑混合。在毛細管中聚焦完成后,可原位檢測蛋白樣品的 pI。Aimsmass 有兩種方法可用于 pI 測定,我們的科學家將根據您的特殊要求和樣品類型優化方案。
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