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C 端測序

基于蛋白質的生物制藥是在工程細胞中通過復雜的過程生產的,可能包含各種各樣的變異和翻譯后修飾,必須監控或控制以確保產品質量。

利用穩健的克隆、表達、純化和分析方法,在哺乳動物細胞中生產重組蛋白已經非常成熟。然而,意想不到的翻譯后修飾(PTMs)或蛋白質產物變異可能會發生。這些可能包括不尋常的或意想不到的糖基化、氧化、脫酰胺化、糖基化、磷酸化、硫代化、S-硫代化、序列擴展等等。液相色譜-質譜聯用或串聯質譜聯用(LC-MS 和 LC-MS/MS)已成為鑒定共價修飾(如 PTMs)或截斷引起的質量差異的分析“工具箱”的首選。高分辨率和質量精度的質譜儀器,如電噴霧電離飛行時間(ESI-TOF)儀器,也有助于對這些變化進行有信心的識別。甚至更高的質量精度可以通過某些儀器如軌道阱或傅里葉變換-離子回旋共振(FT-ICR)獲得。高分辨率儀器,加上 MS/MS 的功能,使 MS 成為蛋白質治療表征中不可缺少的工具,在最近的生物制品許可申請中使用是比較頻繁顯見的。

在線咨詢

最近研發發現通過質譜分析,在穩定轉染的中國倉鼠卵巢(CHO)細胞中發現了大量低水平(~ 1-5%)的雜質。這些分子包括抗體和 Fc 融合蛋白,其中 Fc 位于構建物的 C 端。經液相色譜-質譜(LC-MS)測定,雜質比預期質量大~1177Da。經過胰酶消化和 LC-MS/MS 分析,雜質以 Fc 序列延伸的形式定位到 Fc 的 C 端。利用不同的標準化碰撞能量(NCE)對擴展肽的兩個電荷態進行目標高能量碰撞解離,導致幾乎完全的片段離子覆蓋。通過從頭測序獲得的氨基酸序列 SLSLSPEAEAASASELFQ 與轉染 CHO 細胞所用的載體序列的一部分相匹配,特別是在蛋白質編碼序列下游的選擇盒的啟動子區域。該修飾是一個意外的剪接事件的結果,由常用的 GGU 密碼子的 C 端甘氨酸與一致的剪接供體相似引起。對甘氨酸的3個替代密碼子進行了測試,結果表明,這些替代密碼子完全消除了不需要的 C 端延伸,從而提高了產品質量。

選擇性剪接在真核生物中是一種正常的、受調節的過程,能夠從較少的基因中產生多種蛋白質產物。替代剪接和非預期剪接對生物療法生產的影響,以及它是否合格作為一個關鍵的質量屬性,確很少被討論。

Aimsmass是一家可靠的生物制藥合作伙伴,擁有專業的蛋白質組學研究資源。我們用一流的實驗平臺和成熟的技術手段為您提供優質的一站式服務。生物制藥行業的質量控制需要蛋白質和多肽藥物分子 C 末端序列的識別和結構分析的信息。特別是 ICH Q6B 指南要求蛋白質(肽)藥物的 C 端序列信息。為此,我們將為您提供全面的 C 端測序技術服務。我們將圍繞 ICH 指南(特別是 ICH Q6B),為您提供全面的符合 GLP/cGMP 要求的 C-末端測序分析服務。

實驗流程

服務優勢

  • 高效低耗時:Top-Down 蛋白測序不需要酶解,可以縮短檢測時耗。
  • 高靈敏性:質譜方法檢測 C 端序列靈敏性較高。
  • 高通量:質譜可獲取足夠肽段片段信息,增加檢測成功率。

服務流程

  • 疑問咨詢
  • 項目確認
  • 提交送樣
  • 項目展開
  • 發生報告
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