治療性蛋白質是一種復雜的重組生物聚合物，通常由20個基因編碼的氨基酸排列組成。氨基酸序列決定了蛋白質的三維結構和與相互作用的蛋白質的功能界面。在發酵、純化、儲存和處理以及強制降解研究過程中，蛋白質產品將經歷多次降解。這些降解可能包括氨基酸側鏈酶促或化學翻譯后修飾（PTM）、聚集和蛋白水解裂解的組合衛生當局要求在生產過程中監測這些翻譯后修飾和穩定性。因此，為量化這些PTMs而設計的選擇性和穩健的分析方法的可用性是最重要的。廣泛的分析技術可以在非GMP環境中廣泛地表征重組蛋白，但可能需要后續的鑒定，并在產品上市時，根據人用藥品注冊技術要求協調國際會議（ICH）指南進行全面驗證。
高效液相色譜（HPLC）已經是一種成熟的通過尺寸排除或離子交換來測定完整蛋白質的技術。然而，近年來反相色譜（RP）固定相（300A大孔徑或短烷基鏈融合核顆粒）的技術發展，使其成為分析完整蛋白質的重要工具。高效液相色譜（HPLC）可以作為實時測量產品純度的工具，從而大大提高了操作效率，減少了產品質量的可變性，從而實現自動化和控制。它在制藥、化工和電子等工業領域的應用已經得到了廣泛的證明。
色譜法是根據固定相和流動相的相對親和度將混合物中各組分分離的過程。是他通過固體吸附劑柱發現了色譜法，他創造了色譜法這個術語，用來表示顏色化合物的分離。柱層析法是最常用的一種，將固定相放入柱中，然后泵送流動相。此外，由于其固有性質，高效液相色譜在生物分子分析中得到了廣泛的應用。根據不同的理論，有不同的色譜方法正在被開發。高效液相色譜（HPLC）的基本程序是使用高壓色譜柱處理樣品，樣品中包括流動相，由填充有適當基質的泵激勵。分離是通過分子與柱基質的微分相互作用實現的，然后根據通過柱所需的時間進行分離。然后用合適的探測器對分離的分子信號進行檢測，并在計算機系統上對數據進行處理。各種蛋白質在疏水性、電荷、生物親和和大小等方面的微小差異，發展了一些基本類型的色譜技術，這些方法的不同主要在于用于實現蛋白質分子分離的固定相類型。
液相色譜（LC）方法已成功地用于監測單克隆抗體的含量、純度、鑒別和化學穩定性。鑒于單克隆抗體的大分子性質，高效液相色譜法（SE-HPLC）也被用于定量和確定天然大小，并揭示在表達、純化和加工以及儲存和給藥過程中可能形成的聚集物。反相高效液相色譜法（RP-HPLC）是一種高精度的液相色譜法以及相關蛋白變異或降解產物分析的靈敏技術。單克隆抗體可在過氧化或光脅迫條件下誘導氧化，導致疏水性降低，并可被反相高效液相色譜分離。
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